Com o objetivo de contribuir com conhecimentos sobre a reprodução em laboratório de ostras nativas do gênero crassostrea e estudar as possíveis interações entre as espécies cultivadas no brasil, o presente trabalho avaliou: 1) um método de anestesia e amostragem de tecido gonádico sem sacrifício de animais para a análise do estado de desenvolvimento sexual; 2) a hibridação entre a espécie de ostra do pacífico, crassostrea gigas, e as espécies nativas, c. rhizophorae e c. gasar; e 3) o uso de marcadores de dna mitocondrial e nuclear para a identificação de híbridos. como resultados, o uso de cloreto de magnésio (50 g.l-1), aplicado à água do mar, promoveu o relaxamento muscular e a abertura das valvas nas três espécies de ostras estudadas, permitindo biópsias de tecido gonádico com seringas e agulhas e a determinação do sexo dos animais. os procedimentos de anestesia e amostragem de tecido não causaram mortalidade nestes indivíduos que apresentaram 100% de sobrevivência após 10 dias. após o uso do anestésico, também não foram observadas alterações na atividade reprodutiva e na geração de larvas-d de c. gigas. a partir dos cruzamentos recíprocos entre c. gigas, c. rhizophorae e c. gasar, houve sucesso assimétrico na fecundação de oócitos de c. rhizophorae (r) com espermatozoides de c. gigas (g), oócitos de c. gasar (b) com espermatozoides de c. gigas (g) e oócitos de c. rhizophorae (r) com espermatozoides de c. gasar (b). a compatibilidade unidirecional de gametas entre as três espécies resultou na formação de larvas híbridas que apresentaram crescimento similar à espécie materna até sete dias de idade. após este período, as larvas pararam de crescer e morreram. as análises de marcadores moleculares confirmaram que as progênies rg eram híbridos verdadeiros e continham o dna de ambas as espécies parentais em seu genoma. a inviabilidade no desenvolvimento de larvas híbridas interespecíficas em laboratório sugere que a incompatibilidade genômica é suficiente para evitar o risco de hibridação natural entre c. gigas e as espécies nativas c. rhizophorae e c. gasar