Este trabalho objetivou o estudo das variáveis que interferem na síntese enzimática de acetato de eugenol em sistema livre de solvente. eugenol, presente no óleo essencial de cravo-da-índia, e anidrido acético foram empregados como substratos para a reação. inicialmente, para a seleção do melhor biocatalisador, foram utilizadas as lipases comerciais novozym 435, lipozyme rm im e lipozyme tl im, além de avaliar-se a influência da umidade das enzimas na produção de acetato de eugenila. com o biocatalisador escolhido avaliou-se o efeito da velocidade de agitação na produção de acetato de eugenila. a partir dos planejamentos experimentais se obteve a maior conversão (83,54%) nas condições 1:5 de razão molar (mol de eugenol:mol de anidrido acético), 5% (m/m de substrato) de concentração de enzima e 70 ºc de temperatura. através do primeiro estudo cinético considerou-se a concentração de 5% com 60 min (1 h) de tempo reacional como a melhor condição (90,73% atingido); para o segundo estudo cinético escolheu-se a razão molar 1:5 mol:mol em 120 min (2 h), já que atingiu 92,86% de acetato de eugenila. o reuso enzimático com lipozyme tl im apresentou uma elevada conversão de 94,32%. no segundo ciclo a conversão caiu para 75,18%, e no terceiro ciclo para 53,17%. da amostra obtida na condição experimental otimizada e purificada confirmou-se através da rmn-1h que os espectros com seus respectivos deslocamentos dos átomos pertencem a uma molécula de acetato de eugenila. na atividade antimicrobiana a média das bactérias gram-negativas foi 17,55 mm, pelo qual foram mais sensíveis ao poder antimicrobiano do acetato de eugenila, em comparação das bactérias gram-positivas, que tiveram uma média de 16,62 mm de halo de inibição. estes resultados demonstram a importância da reação de esterificação enzimática para melhorar as propriedades do óleo essencial de cravo-da-índia, para que o mesmo possa ser aplicado como antimicrobiano natural em alimentos e bebidas.