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Universidade Federal de Santa catarina (UFSC)
Programa de Pós-graduação em Engenharia, Gestão e Mídia do Conhecimento (PPGEGC)
Detalhes do Documento Analisado

Centro: Ciências Agrárias

Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos

Dimensão Institucional: Pós-Graduação

Dimensão ODS: Ambiental

Tipo do Documento: Dissertação

Título: DESENVOLVIMENTO DE INICIADORES E SONDA ESPÉCIE-ESPECÍFICOS PARA QUANTIFICAÇÃO POR PCR EM TEMPO REAL DE FEIJÃO (PHASEOLUS VULGARIS L.) EM ALIMENTOS

Orientador
  • ANA CAROLINA MAISONNAVE ARISI
Aluno
  • GUSTAVO LUIZ VENTURELLI

Conteúdo

A cada ano, no brasil, o número de aprovações para eventos geneticamente modificados cresce, bem como a área plantada de culturas transgênicas. uma vez que no brasil a legislação exige que produtos que contenham mais de 1% de organismos geneticamente modificados (ogm) em sua composição sejam rotulados, a identificação e quantificação destes ogm se fazem necessária. o objetivo deste trabalho foi desenvolver um método de detecção e quantificação, por pcr em tempo real, para o feijoeiro gm embrapa 5.1 a partir de uma nova referência endógena táxon-específica para phaseolus vulgaris, tendo como alvo uma sequência de um gene de proteína. para isso, três genes candidatos foram selecionados e os iniciadores testados com sybr green. o ensaio para o gene da arcelina não apresentou amplificação. ambos os ensaios para o gene da lectina e faseolina apresentaram especificidade esperada, entretanto o da lectina apresentou maior especificidade e eficiência. uma sonda taqman foi então desenhada, para tornar o ensaio da lectina ainda mais específico. a especificidade do ensaio lec foi testada com 50 amostras de feijão, provenientes de dois pools genéticos, andino e mesoamericano e 15 amostras de controle negativo. o ensaio táxon-específico fei, previamente desenvolvido, foi testado com 44 amostras de feijão, a fim de comparação com o ensaio lec. as amostras de dna de feijão apresentaram a amplificação esperada para ambos os ensaios, lec e fei, apresentando um ct médio de 20,3 ± 0,73 e 26,34 ± 1,26, respectivamente. isto sugere que o ensaio lec possui uma especificidade maior que o ensaio fei. a alta homogeneidade apresentada capacita o ensaio lec a detectar variedades de feijão dos dois pools genéticos existentes. o ensaio lec apresentou amplificação com ct tardio (ct > 35) para quatro amostras negativas, porém em apenas algumas reações onde foram testadas. as eficiências do método lec foram testadas com as amostras pérola, pérola gm, pontal e pontal gm e variaram de 92% a 101% com o r2 variando entre 0,994 e 0,998. o limite de detecção para o método foi de 101 cópias de dna genômico. os resultados obtidos com o ensaio lec estão dentro dos parâmetros propostos pelo european network of gmo laboratories (engl), podendo, desta forma, o ensaio ser utilizado em estudos de análise de feijão gm. além disso, os iniciadores desenvolvidos podem ser utilizados para quantificação e detecção tanto do feijão convencional quanto do feijoeiro embrapa 5.1 com ambos os sistemas de pcr, taqman e sybr green.

Pós-processamento: Índice de Shannon: 3.97551

ODS 1 ODS 2 ODS 3 ODS 4 ODS 5 ODS 6 ODS 7 ODS 8 ODS 9 ODS 10 ODS 11 ODS 12 ODS 13 ODS 14 ODS 15 ODS 16
4,64% 5,16% 7,16% 6,06% 5,74% 4,80% 6,04% 7,54% 6,26% 4,68% 8,14% 5,55% 5,69% 8,16% 7,61% 6,77%
ODS Predominates
ODS 14
ODS 1

4,64%

ODS 2

5,16%

ODS 3

7,16%

ODS 4

6,06%

ODS 5

5,74%

ODS 6

4,80%

ODS 7

6,04%

ODS 8

7,54%

ODS 9

6,26%

ODS 10

4,68%

ODS 11

8,14%

ODS 12

5,55%

ODS 13

5,69%

ODS 14

8,16%

ODS 15

7,61%

ODS 16

6,77%