
Universidade Federal de Santa catarina (UFSC)
Programa de Pós-graduação em Engenharia, Gestão e Mídia do Conhecimento (PPGEGC)
Detalhes do Documento Analisado
Centro: Ciências Agrárias
Programa de Pós-Graduação: Programa de Pós-Graduação em Ciência dos Alimentos
Dimensão Institucional: Pós-Graduação
Dimensão ODS: Ambiental
Tipo do Documento: Dissertação
Título: DESENVOLVIMENTO DE INICIADORES E SONDA ESPÉCIE-ESPECÍFICOS PARA QUANTIFICAÇÃO POR PCR EM TEMPO REAL DE FEIJÃO (PHASEOLUS VULGARIS L.) EM ALIMENTOS
Orientador
- ANA CAROLINA MAISONNAVE ARISI
Aluno
- GUSTAVO LUIZ VENTURELLI
Conteúdo
A cada ano, no brasil, o número de aprovações para eventos geneticamente modificados cresce, bem como a área plantada de culturas transgênicas. uma vez que no brasil a legislação exige que produtos que contenham mais de 1% de organismos geneticamente modificados (ogm) em sua composição sejam rotulados, a identificação e quantificação destes ogm se fazem necessária. o objetivo deste trabalho foi desenvolver um método de detecção e quantificação, por pcr em tempo real, para o feijoeiro gm embrapa 5.1 a partir de uma nova referência endógena táxon-específica para phaseolus vulgaris, tendo como alvo uma sequência de um gene de proteína. para isso, três genes candidatos foram selecionados e os iniciadores testados com sybr green. o ensaio para o gene da arcelina não apresentou amplificação. ambos os ensaios para o gene da lectina e faseolina apresentaram especificidade esperada, entretanto o da lectina apresentou maior especificidade e eficiência. uma sonda taqman foi então desenhada, para tornar o ensaio da lectina ainda mais específico. a especificidade do ensaio lec foi testada com 50 amostras de feijão, provenientes de dois pools genéticos, andino e mesoamericano e 15 amostras de controle negativo. o ensaio táxon-específico fei, previamente desenvolvido, foi testado com 44 amostras de feijão, a fim de comparação com o ensaio lec. as amostras de dna de feijão apresentaram a amplificação esperada para ambos os ensaios, lec e fei, apresentando um ct médio de 20,3 ± 0,73 e 26,34 ± 1,26, respectivamente. isto sugere que o ensaio lec possui uma especificidade maior que o ensaio fei. a alta homogeneidade apresentada capacita o ensaio lec a detectar variedades de feijão dos dois pools genéticos existentes. o ensaio lec apresentou amplificação com ct tardio (ct > 35) para quatro amostras negativas, porém em apenas algumas reações onde foram testadas. as eficiências do método lec foram testadas com as amostras pérola, pérola gm, pontal e pontal gm e variaram de 92% a 101% com o r2 variando entre 0,994 e 0,998. o limite de detecção para o método foi de 101 cópias de dna genômico. os resultados obtidos com o ensaio lec estão dentro dos parâmetros propostos pelo european network of gmo laboratories (engl), podendo, desta forma, o ensaio ser utilizado em estudos de análise de feijão gm. além disso, os iniciadores desenvolvidos podem ser utilizados para quantificação e detecção tanto do feijão convencional quanto do feijoeiro embrapa 5.1 com ambos os sistemas de pcr, taqman e sybr green.
Pós-processamento: Índice de Shannon: 3.97551
ODS 1 | ODS 2 | ODS 3 | ODS 4 | ODS 5 | ODS 6 | ODS 7 | ODS 8 | ODS 9 | ODS 10 | ODS 11 | ODS 12 | ODS 13 | ODS 14 | ODS 15 | ODS 16 |
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4,64% | 5,16% | 7,16% | 6,06% | 5,74% | 4,80% | 6,04% | 7,54% | 6,26% | 4,68% | 8,14% | 5,55% | 5,69% | 8,16% | 7,61% | 6,77% |
ODS Predominates


4,64%

5,16%

7,16%

6,06%

5,74%

4,80%

6,04%

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6,26%

4,68%

8,14%

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7,61%

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