Pleopeltis lepidopteris (langsd. & fisch) de la sota (polypodiaceae) é uma samambaia endêmica importante da vegetação de restingas do sul do brasil. a vegetação de restinga vem sofrendo fortes ameaças com o aumento da especulação imobiliária, ocupação humana, a poluição e a extração. esporos de p. lepidopteris foram coletados em setembro de 2013 e março de 2014 nas dunas da praia da joaquina, florianópolis, sc, brasil. para preservar eficazmente esporos de p. lepidopteris foram avaliados os efeitos de diferentes tratamentos na viabilidade dos esporos e desenvolvimento gametofítico. foi analisada a viabilidade de esporos recém coletados em setembro de 2013. os esporos foram armazenados: por um e oito meses nas frondes à temperatura ambiente; sob-refrigeração 7±1ºc; imersos em nitrogênio líquido (-196ºc) não esterilizados e esterilizados superficialmente após degelo. foram realizadas análises morfológicas de esporos e gametófitos por meio de microscopia de luz (ml), microscopia confocal de varredura a laser (mcvl), microscopia eletrônica de varredura (mev) e microscopia eletrônica de transmissão (met). análises de conteúdo de pigmentos fotossintetizantes e fluorescência da clorofila a foram realizadas em gametófitos de 150 dias. esporos de p. lepidopteris perdem rapidamente a viabilidade dentro de um mês e morrem após oito meses, quando armazenados à temperatura ambiente. houve grande redução da viabilidade quando os esporos foram armazenados a 7±1ºc após oito meses. em contraste, esporos sobreviveram e apresentaram as mais altas porcentagens de germinação quando armazenados em nitrogênio líquido indiferentemente da época de coleta. esporos criopreservados analisados em mev apresentaram a superfície e as ornamentações mais ásperas do que os esporos controles. a criopreservação aparentemente escarificou a superfície dos esporos. houve aceleração e desenvolvimento normal de gametófitos oriundos de esporos criopreservados e surgimento antecipado de estruturas reprodutivas. não houve diferença na ultraestrutura de esporos e gametófitos de ambos os tratamentos e nem nos conteúdos de pigmentos fotossintetizantes e nos parâmetros fotossintéticos obtidos a partir da análise da fluorescência da clorofila a. a criopreservação mostrou-se eficaz para a conservação ex situ em bancos de germoplasma de esporos de pleopeltis lepidopteris, mantendo sua viabilidade e integridade fisiológica.