O fenômeno conhecido como “one trial tolerance” (ott) vem sendo estudado durante os últimos 25 anos. porém, os seus mecanismos subjacentes ainda não foram totalmente desvendados. no ott, uma simples experiência no labirinto em cruz elevado (lce) reduz significativamente a ação das drogas que exercem um efeito ansiolítico em roedores, quando estes são reexpostos ao teste. o estado farmacológico dos roedores durante a primeira exposição ao teste não influencia no desenvolvimento da tolerância criada por esta primeira passagem pelo lce, e, o fenômeno, parece persistir mesmo com um intervalo de duas semanas entre o teste e o reteste. no presente trabalho, nós investigamos o ott em machos e fêmeas de duas linhagens de ratos, sla16 (shr.lew-anxrr16) e seu controle isogênico shr (spontaneously hipertensive rats), utilizando doses baixas de midazolam (mdz), no teste triplo (tt) (experimento 1). após, nós avaliamos o ott em machos e fêmeas sla16 e shr no tt, em um estado sem droga (experimento 2). por fim, nós pesquisamos o ott em machos e fêmeas sla16 e shr no lce, também em um estado sem droga (experimento 3). nossos resultados demonstraram que no experimento 1, em machos, não ocorreu o ott e em fêmeas a ausência do ott foi verificada nos dias 3 e 4. no experimento 2, os resultados sugeriram a ausência de ott em todos os grupos. por fim, no experimento 3, os resultados sugerem que ao menos as fêmeas sla16 apresentam total ausência de ott em um estado sem droga quando testada também no lce. portanto, o tt demonstrou ser um teste comportamental útil para pesquisa de novos fármacos podendo ser utilizado para triagem de drogas ansiolíticas. além disso, a linhagem sla16, especialmente as fêmeas, parecem ser uma ferramenta genética promissora para a pesquisa de novos fármacos, ou dos mecanismos biológicos subjacentes ao ott.